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银水湾论坛会议笔记|龚建森：鸡白痢凝集抗原的研制

一、鸡白痢的危害

鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的传染性疾�。桓腥炯突鸺α街侄�，会降低种鸡产蛋率，降低种蛋受精率、孵化率、出雏率和健雏率，降低后代生产性能，感染SPF鸡后还会导致胚源活疫苗污染。

鸡白痢沙门氏菌原本是一种兽医界发现较早的血清型，但随着沙门氏菌血清型命名规则的不断完善，目前已将鸡白痢和鸡伤寒这2者具有共同表面抗原的沙门氏菌统称为鸡伤寒血清型，但进一步分为鸡白痢和鸡伤寒2种生物型，而我国的国家标准则将2者标注为“鸡-雏沙门氏菌”。

1.鸡白痢鸡伤寒的生化鉴别

由于鸡白痢、鸡伤寒具有诸多相似性，需进行有效的区分。国内外对两个病原已经研究上百年时间，传统的鉴别方式是生化方法，主要通过四个指标：葡萄糖产气、卫矛醇、麦芽糖和鸟氨酸脱羧，鸡白痢沙门氏菌通常是阴性，鸡伤寒沙门氏菌通常为阳性。但通过实验室的大量样本验证，只有卫矛醇和鸟氨酸这两个指标更具有特异性。

2.鸡白痢、鸡伤寒的分子鉴别

因为生化试验非常费时费力，所以我们希望能快速区分这两个病原，鉴于此，授课专家团队通过基因的快速检测建立了一系列方法，如基于pegB靶标的FRET-PCR和基于fimH靶标的PCR-HRM。

3.种鸡感染鸡白痢沙门氏菌对生产性能的影响

基于早期试验数据的分析，发现种鸡感染鸡白痢的产蛋率和出雏率都会大幅下降，无精率和死胚率都会大幅上升。

二、鸡白痢的防控

1.鸡白痢沙门氏菌的感染特性

（1）禽沙门氏菌病可分为三类：第一类是鸡白�。诙嗍乔萆撕�，第三类是禽副伤寒。

（2）鸡白痢和禽伤寒均由单一病原感染所致，因而具有独特的感染特性。以宿主的生长史来看，分为两个阶段，以性成熟为分界线：

?在性成熟前，雏鸡和青年鸡感染后，雏鸡一般会导致死亡，青年鸡会转变为局部感染或慢性感染，用药有概率清除鸡白�。�

?在性成熟后，鸡白痢会迅速进入性器官定植并长期存活，有报道阐述，鸡白痢可以在生殖系统存活70周的时间，贯穿整个产蛋周期，且此阶段用药很难清除病原，因而成年鸡感染后只能执行检疫净化。

2.临床常用的沙门氏菌防控产品

临床常用的沙门氏菌防控产品一般为抗生素、噬菌体、中草药、抗菌肽、酸化剂、植物精油、疫苗和益生菌，上述产品对于鸡白痢防控而言，仅在青年鸡时期有效，成年鸡使用只能压制但不能清除病原，且存在感染抗体检测，因而不推荐使用。

3.鸡白痢的最适检疫对象

鸡白痢可以检测抗原或抗体。而对于病原的检测花费的时间和成本较高，且针对粪便的检测结果不能反应机体的真实感染状况，所以国内外更倾向于检测抗体，因此了解鸡白痢抗体的生成规律以及不同检测方法的特点是非常重要的。

较为简便的鸡白痢血清学诊断方法包括平板凝集实验（全血/血清）、试管凝集实验（全血/血清）和琼脂扩散实验（全血/血清/卵黄）。

?相较来说，平板凝集反应时间迅速（2min），是唯一可进行现场检测的方法，检测节点是在性成熟后；

?试管凝集反应时间较长（24h），准确性较平板凝集更高，可在实验室检测，检测节点是在性成熟后；

?琼脂扩散反应时间最长（24h~48h），准确性最高，可在实验室检测，检测节点是全饲养周期。

4.鸡白痢感染与凝集抗体的对应关系

在自然感染条件，不使用药物、噬菌体、疫苗等防控产品条件下，发现雏鸡产生凝集抗体的能力非常弱，而青年鸡产生凝集抗体结果非常不稳定，成年鸡性成熟后，病原感染后很快抗体水平会升高，所以成年鸡最适合进行凝集抗体的检测。我们国家目前从国标到行标以及地方标准，基本都是采用全血平板凝集实验来进行鸡白痢检疫。

5.我国鸡白痢净化场评估要求

我国疫控中心制定的净化场评估要求规定，鸡白痢采取血清学抽检，祖代以上养殖场阳性率低于0.2%，父母代场阳性率低于0.5%；连续两年以上无临床病例；现场综合审查通过。

三、鸡白痢凝集抗原的研制

1.优良的鸡白痢凝集抗原需具备的特性

优良的鸡白痢凝集抗原需具备灵敏度高、特异性强、反应速度快、凝集图像清晰易辨、检测结果稳定和保存期长的特性。授课专家特别提及，从长期实践来看，保存期越长的抗原，它的稳定性越好。

授课专家提到，江苏省家禽科学研究所自1959年建所后，即将鸡白痢作为一项传统研究项目，至今未曾间断。上世纪60年代即开始筛选稳定性良好的鸡白痢抗原制造菌种，研制灵敏、快速、特异的鸡白痢平板凝集染色抗原。经过多年的研究与应用，研制的染色抗原已达到国内领先、国际先进水平。经全国22个省、市、自治区，近百个科研、教学、生产单位应用，总检测鸡数近2亿羽。并在上世纪70-80年代，成功实施国内三大部级原种鸡场鸡白痢净化工作，包括黑龙江省哈尔滨原种鸡场、北京种禽公司原种鸡场和上海市新杨种畜场。

授课专家以北京种禽公司原种鸡场的鸡白痢净化举例。该原种鸡场于1974年成立于北京昌平，1978年受鸡白痢困扰与江苏省家禽科学研究所合作开始鸡白痢检疫净化；至1979年底，基本控制消灭鸡白�。⒘宋夜谝桓鑫藜Π琢∩趁攀暇脑旨Τ。�后期连续跟踪检疫至1986年，累计检测种鸡54622羽份，全部为阴性。专家讲到，当时的种鸡场无论是硬件条件，生物安全措施与管理制度与目前种鸡场相比均存在较大差距，但仍可做到彻底净化的最关键因素就是抗原的质量保障。

授课专家阐述了近年来该团队在鸡白痢凝集抗原的开发与应用工作，如2018年与温氏食品集团股份有限公司合作开展自家抗原研制与应用，并在2年内将这个国内最大的黄羽肉鸡育种企业完成了鸡白痢的彻底净化。在2019年，又与哈尔滨22bet·(中国)官方网站科技股份有限公司开展产品孵化，通过6年时间的努力已完成各项工艺的研究。

2.如何确保新产品的性能

主要5个方面：新菌种的核心优势；培养与制备工艺的技术改进与优化；特异性与稳定性保证；敏感性、批间重复性、环境使用稳定性；临床检验与实践应用。

授课专家提到，未进行筛选及选育的鸡白痢菌株通常O抗原含量低、抗原成分不稳定和遗传稳定性低。为了获得优良的抗原制造菌种，授课专家对菌种库中保存的1000余株鸡白痢沙门氏菌进行了筛选。江苏省家禽科学研究所拥有数量丰富、时间跨度大（1953年至今）、地理分布广的鸡白痢沙门氏菌国内分离株（其为CVCC提供的鸡白痢沙门氏菌参考菌株占比近80%），基于上述菌种资源，成功筛选到抗原候选菌株。同时为了方便筛�。�还创新建立了配套的鸡白痢沙门氏菌显微菌落分型方法，用于区分标准型（S）、中间型（I）和变异型（V）。

3.新菌种的核心优势

（1）涵盖所有菌落型：YBC/yBC/Ybc

（2）涵盖所有血清亚型：标准型、变异型、中间型

（3）抗原高表达：O抗原产量提升2.14倍。

（4）特异性表位富集：富含O9、O122、O123三种O抗原分子。

（5）遗传稳定性强：抗原制备菌株传代后15代后，检测其菌落型变异率只有3.06%，其血清亚型无改变。未经此方法筛选的菌株其菌落型变异率为筛选菌株的5.65倍，血清亚型变异率为筛选菌株的8.06倍。

4.培养与制备工艺的技术改进与优化

授课专家讲到，对研发产品进行了包括培养基配方筛选、最佳培养时间筛选、抗原的收获方式优化和抗原的灭活条件优化等上百个制备工艺的技术改进与优化。

以目前商品化的抗原产品为例，其使用标准阳性血清对抗原进行标定，导致抗原浓度并不固定，可能造成检测结果不稳定的情况，而新产品采用固定抗原浓度来达到更稳定的检测效果。

专家提到，新产品针对鸡的各种特异性质控血清进行了特异性鉴定，并且进行了敏感性、批间重复性和环境使用稳定性试验，验证了敏感性结果优于商品化产品2-4倍；三个批次检测结果完全一致，重复性良好；产品的极限温度检测结果稳定。在临床上进行了检测和应用，同时将现场的全血试验血清在实验室进行复核。

5. 新抗原的特点

（1）特异性强（无假阳性）

（2）敏感度高（优于商品化产品1~2个稀释度，无假阴性）

（3）反应速度快（#和+++的阳性样品约20-30s即可凝集）

（4）凝集图像清晰易辨（凝集颗粒明显，底液澄清，利于判定）

（5）检测结果稳定（批间和批内检测结果完全一致）

（6）保存期长（可4-8℃稳定保存5年以上）

（7）使用剂量低（每个反应只需25μL，仅商品化产品一半）

四、总结

本次授课专家的报告围绕鸡白痢展开，首先阐述了理论与技术支撑：系统梳理了鸡白痢的�：�、鉴别方法及防控逻辑，明确了鸡白痢与鸡伤寒的关联与区分，为相关疾病的基础研究和临床诊断提供了清晰的理论框架和技术参考。其后，做了生产实践指导：针对种鸡感染鸡白痢对产蛋率、孵化率等生产性能的影响，以及不同生长阶段的感染特性，提出了具体的检疫对象、方法和净化标准的讲解，为养殖场科学防控鸡白痢、提升生产效益提供了可操作的实践方案，助力行业降低经济损失。最后，展示了技术创新与应用价值：详细介绍了鸡白痢凝集抗原的研发成果，尤其是新抗原在特异性、灵敏度、稳定性等方面的突破，为我国鸡白痢的长期防控和行业标准化提供了关键技术保障，为鸡白痢的净化提供了很好的手段，对推动家禽养殖业的健康可持续发展具有重要现实意义。

会议笔记由哈尔滨22bet·(中国)官方网站科技股份有限公司王美娇记录整理。

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